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摘要研究通過(guò)電穿孔法將攜帶周期型馬來(lái)絲蟲(chóng)基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞，利用某試劑抗生素篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染單克隆株。經(jīng)威尼德分子雜交儀檢測(cè)基因整合，qPCR及Westernblot驗(yàn)證表達(dá)水平，結(jié)合威尼德紫外交聯(lián)儀分析蛋白修飾。結(jié)果顯示，目標(biāo)基因在細(xì)胞中呈現(xiàn)穩(wěn)定周期性表達(dá)，晝夜節(jié)律振幅達(dá)3.8倍，為絲蟲(chóng)生物鐘機(jī)制研究提供了可重復(fù)的體外模型。引言馬來(lái)絲蟲(chóng)（Brugiamalayi）作為淋巴絲蟲(chóng)病的主要病原體，其生命周期受宿主生物鐘調(diào)控的現(xiàn)象已引起廣泛關(guān)注。近年研究發(fā)現(xiàn)，絲蟲(chóng)體內(nèi)存...

摘要TRAIL基因轉(zhuǎn)染至神經(jīng)干細(xì)胞，評(píng)估其對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向殺傷效應(yīng)。利用威尼德電穿孔儀完成基因轉(zhuǎn)染，采用某試劑進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)及功能驗(yàn)證。體外實(shí)驗(yàn)顯示，轉(zhuǎn)染后神經(jīng)干細(xì)胞高表達(dá)TRAIL蛋白，顯著誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其可抑制裸鼠移植瘤生長(zhǎng)。結(jié)果表明，神經(jīng)干細(xì)胞攜帶TRAIL基因具備潛在抗腫瘤應(yīng)用價(jià)值。引言腫瘤的靶向治療是當(dāng)前研究熱點(diǎn)，傳統(tǒng)化療及放療因缺乏特異性易損傷正常組織。TRAIL（腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體）可選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但其半衰期短、全身毒性限制臨...

摘要研究通過(guò)構(gòu)建bFGF基因表達(dá)載體，采用威尼德電穿孔儀對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，探討其表達(dá)效率及生物學(xué)功能。實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了轉(zhuǎn)染條件，并通過(guò)Westernblot和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中bFGF蛋白顯著上調(diào)，且細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)。該研究為基于基因修飾的骨再生治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。引言堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）是調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和組織修復(fù)的關(guān)鍵因子，其在骨代謝中的作用備受關(guān)注。骨髓基質(zhì)細(xì)胞（BMSCs）具有多向分化潛能，是骨組織工程的重要種子細(xì)...

摘要酪氨酸羥化酶（TH）基因的重組質(zhì)粒，利用威尼德電穿孔儀將其轉(zhuǎn)染至神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs），探討TH基因在NSCs中的表達(dá)效率及對(duì)多巴胺能分化的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞TH蛋白表達(dá)顯著升高，且分化后多巴胺能神經(jīng)元標(biāo)志物陽(yáng)性率增加。結(jié)果表明，TH基因轉(zhuǎn)染可有效促進(jìn)NSCs向多巴胺能方向分化，為神經(jīng)退行性疾病的細(xì)胞治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。引言神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）因其自我更新和多向分化潛能，成為再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。酪氨酸羥化酶（TH）作為多巴胺合成的限速酶，其表達(dá)水平直接影響...

選擇適合植物原生質(zhì)體電穿孔實(shí)驗(yàn)的電穿孔儀，需要考慮以下幾個(gè)方面：1.電穿孔儀的類(lèi)型：雙波全能型電穿孔儀：威尼德的雙波全能型電穿孔儀等，結(jié)合了指數(shù)波和方波的優(yōu)點(diǎn)，具有更廣泛的適用性和靈活性，可根據(jù)不同植物原生質(zhì)體的特性和實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的波型和參數(shù)，是進(jìn)行植物原生質(zhì)體電穿孔實(shí)驗(yàn)的理想選擇之一。2.參數(shù)設(shè)置范圍：電壓調(diào)節(jié)范圍：植物原生質(zhì)體電穿孔實(shí)驗(yàn)通常需要較高的電壓，一般在1003000V之間。脈沖持續(xù)時(shí)間：脈沖持續(xù)時(shí)間一般在1μs10ms之間。較短的脈沖適用于對(duì)電場(chǎng)敏感的植物...

摘要分子克隆技術(shù)構(gòu)建了RAB5A基因的真核表達(dá)載體，并驗(yàn)證其功能。利用威尼德電穿孔儀將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞，通過(guò)熒光顯微觀察和Westernblot檢測(cè)RAB5A蛋白表達(dá)。結(jié)果表明，載體成功定向克隆RAB5A基因，并在真核細(xì)胞中高效表達(dá)，為后續(xù)研究RAB5A的細(xì)胞功能奠定基礎(chǔ)。引言RAB5A是調(diào)控早期內(nèi)吞體運(yùn)輸?shù)年P(guān)鍵小GTP酶，其功能異常與腫瘤轉(zhuǎn)移、神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān)。目前，針對(duì)RAB5A的研究多依賴(lài)瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)，但穩(wěn)定表達(dá)載體的缺乏限制了其功能分析的深度。定...

摘要內(nèi)蒙株細(xì)粒棘球蚴抗原基因Eg95為靶點(diǎn)，通過(guò)分子克隆技術(shù)構(gòu)建真核表達(dá)載體，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，驗(yàn)證抗原蛋白表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，核酸疫苗可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性抗體及Th1型免疫應(yīng)答，為包蟲(chóng)病防控提供新策略。引言細(xì)粒棘球蚴病（囊型包蟲(chóng)病）是人畜共患寄生蟲(chóng)病，流行于畜牧區(qū)，嚴(yán)重威脅公共衛(wèi)生安全。傳統(tǒng)疫苗研發(fā)多依賴(lài)重組蛋白或滅活病原體，存在成本高、免疫原性不足等局限。核酸疫苗通過(guò)遞送抗原基因至宿主細(xì)胞，直接表達(dá)靶蛋白，可激活細(xì)胞與體液免疫雙重應(yīng)答，具有高效、安...

摘要探究真核細(xì)胞中牙周炎基因疫苗的表達(dá)特性。通過(guò)構(gòu)建攜帶牙周炎相關(guān)抗原基因的重組質(zhì)粒，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞，結(jié)合熒光定量PCR、Westernblot及流式細(xì)胞術(shù)分析基因表達(dá)效率與蛋白定位。實(shí)驗(yàn)表明，疫苗在真核細(xì)胞中高效表達(dá)，且誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答。結(jié)果為牙周炎基因疫苗開(kāi)發(fā)提供理論支持。引言牙周炎是一種由菌斑生物膜引發(fā)的慢性炎癥性疾病，傳統(tǒng)治療手段存在局限性。基因疫苗通過(guò)遞送抗原編碼基因，激發(fā)宿主免疫反應(yīng)，具有高效、持久的潛力。然而，真核細(xì)胞中基因疫苗的表達(dá)效率及調(diào)控...